1972 İstanbul Eyüp doğumlu olan Nejat İşler, tiyatroya lise yıllarında başlamıştır. Okul hayatından sonra ufak tefek alım-satım işlerine giren İşler, Yıldız Teknik Üniversitesi Fotoğraf bölümünü kazanmasına rağmen okula gitmez ve askerliğini yapıp İstanbul’a geri döner. 1991’de Mimar Sinan Üniversitesi Konservatuar Bölümüne giren İşler 1995’te mezun oluncaya kadar devlet tiyatrosunda ve televizyon dizilerinde rol aldı. Aynı dönemde Teşvikiye’de CD ve kitap sattığı işporta tezgahını işletir. Mezuniyetinden sonra arkadaşlarıyla tiyatro kuran İşler, Gurur, Deli Yürek, Şehnaz Tango, Nasıl Evde Kaldım, Dedem, Gofret ve Ben, Aşk ve Gurur, Şeytan Ayrıntıda Gizlidr, Gülbeyaz ve Aliye adlı dizilerin rol aldı.

1999'da ise Eylül Fırtınası adlı filmde ilk kez sinema perdesinde yer aldı. Türkiye’de sinema ve televizyon dizilerinin en popüler isimlerinden biri olan Nejat İşler, 2014’ün Ocak ayında Bodrum’da geçirdiği bir rahatsızlık sonrası, İstanbul’da yoğun ve uzun bir tedavi süreci geçirmiştir. Bu süreçte oyunculuğa ara veren İşler, tedavisi sonrası yakın zamanda yerleştiği Bodrum’a geri dönmüştür. 2014'te Nuri Bilge Ceylan'ın Kış Uykusu filminde, 2016'da ise başrolünü Serenay Sarıkaya ile paylaştığı İkimizin Yerine adlı filmde yer almıştır.